内毒素清除试剂盒

内毒素清除试剂盒

英文名称：Endotoxin Removal Kit 

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

产品及特点 

细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此，内毒素的清除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。本试剂盒使用的是一类高效内毒素清除树脂，它以修饰过的多粘菌素 B（PMB）为配体，进行特异性的内毒素清除。经此专用亲和介质纯化，样品最终的内毒素水平可低于 0.1 EU/mL。本产品的主要特点如下：

1. 高稳定性，高去除效率。

2. 高结合力：> 2, 000, 000 EU/ mL。

3. pH 范围为 5-10 时，亲和介质对内毒素的清除率在 92%以上；pH 值在 7-8时，清除效率最高。

4. 无需恒流泵即可调节流速。

5. 重复使用 5 次不会改变柱子效果。

6. 使用方便，试剂盒中提供无热原缓冲液，无热原收集管及无热原枪头等。

7. 适合纯化对象为蛋白，多肽，抗体，多糖等。

8. 可耐受试剂：20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等。

运输及保存 常温运输，4℃保存, 有效期一年。

自备试剂 0.1 M 的氢氧化钠和 0.1 M 盐酸（用于调节样品 pH，均可从本公司另购）

使用方法 

1. 样品处理：样品的 pH 值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内毒素的 pH 范围在 6-9，但是 7-8 的 pH 范围是纯化的最佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附，0.15-0.5 M NaCl 的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以，纯化之前可以使用处理过的氯化钠，0.1 M 的氢氧化钠或 0.1 M 盐酸来调节离子强度或 pH 值。

2. 活化亲和介质：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除预装柱顶部的盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入 5 mL 的（预冷）再生缓冲液，调节流速控制器，保持流速在 0.25 mL/min（或者 10 滴/min），待再生缓冲液流干，再加入 5 mL 再生缓冲液，再重复操作两次，确保体系保持无热原（即内毒素）存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要 60 分钟完成。

3. 平衡亲和介质：活化完毕后，加入 6 mL 的（预冷）平衡缓冲液，调节流速控制器，保持流速在 0.5 mL/min，流干平衡缓冲液，再按此操作重复两次。这步操作大约需要 40 分钟完成。

4. 内毒素清除：将流速控制器关闭，使用无热原枪头将样品加入，打开控制器，控制流速不高于 0.25 mL/min，流出液体积达到 1.5 mL 后，使用无热原接收管接受样品，样品流干后，再加入 1.5 mL-3.0 mL 的（预冷）平衡缓冲液淋洗，收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。

5. 再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱重新再生，按照步骤 1 重新再生，然后上样纯化。

6. 保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用 10 mL 平衡缓冲液平衡柱子，待平衡液流干，加入 1.5 mL 的再生缓冲液（含 0.02%的叠氮化钠）。