大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞

大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞

英文名称：BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL Competent Cell

运输：干冰

保存：负80度

有效期：6个月

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

产品及特点

本产品来源于 Stratagene 公司的 BL21-Gold 菌株，缺少 Lon 蛋白酶和 OmpT 蛋白 酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的 4 种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、 CUA) 对应的 tRNA （argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含 AT-或 GC- 的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素 抗性。本产品由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率高达 10 8cfu/μg。

菌株基因型为：F - ompT hsdS (rB -mB -) dcm+ Tet r galλ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Spec r]

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据 实际情况分装使用。

以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。 

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量 的 DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器 轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体 琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收， 倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板； 若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于 平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。

4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。