蜂房小甲虫PCR试剂盒

蜂房小甲虫PCR试剂盒

英文名称：Aethina tumida

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点 

气单胞菌属（Aeromonas spp.）属于气单胞菌科，广泛分布于自然界，可从水源、土壤以及人的粪便中分离，引起的疾病广泛存在于哺乳动物（如人、鸟类等）和冷血动物（如鲑、鱼、蛇等）中。在人类主要引起肠内感染和肠外感染，前者主要表现为胃肠炎，患者通常呈症状较轻的水样腹泻，症状严重，呈血性粪便且便中有大量白细胞者（和志贺菌引起的痢疾很相似）较少见，本菌是夏季腹泻的常见病原菌之一，主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素；后者包括败血症、伤口、眼、关节、腹腔内及其他感染，主要与外伤后伤口接触了污染的水有关。因此快速灵敏检测气单胞菌具有重要的意义，本试剂盒就是为此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增气单胞菌 DNA，跟其他微生物无交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 

一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

气单胞菌属通用 PCR

引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（气单胞菌属

通用阳性对照的 100 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 471bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。