烟曲霉PCR试剂盒

烟曲霉PCR试剂盒

英文名称：Aspergillus fumigatus

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产品介绍：

产品及特点

烟曲霉(Aspergillus fumigatus.)属壳霉目、杯霉科、烟曲霉属，是一种重 要的致病菌，也是引起食品腐败的一种真菌。烟曲霉的菌落生长迅速，绒状或 作一定的絮状，暗烟绿色，老后色变得更深。此菌嗜高温，在 45℃或更高的温 度下生长茂盛。在粮食发热霉变的中期和后期常大量出现，促进粮温的升高和 败坏。烟曲霉能寄生在人、鸟类及其它脊椎动物的肺部引起结核症。也能侵染 棉铃和苹果等，引起果实腐烂，或寄藏于种子上。因此快速检测烟曲霉具有重 要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增烟曲霉，但跟其他微生物无交叉反 应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数真菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式真菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模 板 ， 省 略 了 DNA 提 取 步 骤 。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照管 PCR 阳性 对照管 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 烟曲霉 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - PCR 阴性对照（超纯水） - 18 μL - PCR 阳性对照（烟曲霉 PCR 阳性对 照的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应： 过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 60 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。