禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒

禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒

英文名称：Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

禽致病性大肠杆菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli，APEC）会引发大肠杆菌败血症，尤其在冬季发病率高，死淘率通常在 5%-20%，严重的可达 50%，雏鸡在夏季也较多发，病鸡精神不振，采食减少，衰弱和死亡，病鸡腹部膨满，排出黄绿色的稀便，特征性的病变是纤维素性心包炎，气囊混浊肥厚，有干酪样渗出物，肝包膜呈白色混浊，有纤维素性附着物，有时可见白色坏死斑，脾充血肿胀，给养殖业带来较大的经济损失，因此禽致病性大肠杆菌 O1 血清型检测具有重要的意义。本试剂盒根据荧光定量 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增禽致病性大肠杆菌 O1 血清型。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳

性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的 10000

倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作

为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试

剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试

剂盒免费赠送 50 次免 DNA 提取的天净沙 DNA 释放剂，本产品的裂解液

可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。其使用手册可从本公司

网站 www.tiandz.com 通过搜索产品名称天净沙 DNA 释放剂或产品编号

130982 下载。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性

对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照管

PCR 阳性

对照管

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

禽致病性大肠杆菌 O1 血清

型 PCR 引物混合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（超纯水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（禽致病性大

肠杆菌O1血清型PCR阳性

对照的 10000 倍稀释液）

- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

94℃ 30 sec

50℃ 30 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 5 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 261bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。