枯草芽孢杆菌PCR试剂盒

枯草芽孢杆菌PCR试剂盒

英文名称：Bacillus subtilis

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产品介绍：

产品及特点

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是芽孢杆菌属的一种，它们对外界有害因 子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处，具有繁殖快 速、生命力强、耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌 氧繁殖）等特点，枯草芽孢杆菌在生物肥发酵或发酵床制作中应用相当广泛， 可用于畜牧水产饲料添加剂、用于水环境净化，是一种多功能的微生物，也可 以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用，还可以帮助消化，是一种消 化道益生菌，因此快速检测枯草芽孢杆菌具有重要意义。本试剂盒根据 PCR 原 理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增枯草芽孢杆菌，对蜡样芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，大肠杆菌等均无交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其

他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳

性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 枯草芽孢杆菌

PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备

要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试

剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。

核酸释放剂（试用装） 61202 20次（1 mL，绿盖）

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性

对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

枯草芽孢杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照 - 18 μL -

样品制备阳性对照（用 10μL 枯草

芽孢杆菌PCR阳性对照的10000

倍稀释液）

- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（30 个循环）

94℃ 30 sec

52℃ 30 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix

在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR

产物长度为 460 bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩

增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR

扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。