致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用PCR试剂盒

致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用PCR试剂盒

英文名称：Diarrheagenic Escherichia coli

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产品介绍：

产品及特点

能 够 引 起 肠 道 内 急 性 腹 泻 的 大 肠 杆 菌 统 称 为 致 泻 性 大 肠 杆 菌 （Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）根据致病性的不同，致泻性大肠 埃希菌被分为五种，即肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)、肠产肠毒素大肠埃希氏 菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)和 粘附性肠埃希氏菌(EAEC)。,我国发生的食物中毒事件中,细菌性食物中毒的人 数最多,占总中毒人数的 42.8％,其中致泻性大肠埃希氏菌是引起人体以腹泻症 状为主的全球性疾病的常见病原菌,在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传 染病之首,因此快速灵敏检测致泻性大肠杆菌具有重要意义。本试剂盒就是为满 足此需求根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增 CMV，不跟其他病毒发生交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。CMV PCR 阳性对照需要单独放置， 不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂

2. 如果要制备 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳 性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL CMV PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液作为阳性对照，样品制备阴 性对照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个 样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑 制物很可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阴性对照（用水）和一个 PCR 阳性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入 下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照管 PCR 阳性 对照管 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 巨细胞病毒 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - PCR 阴性对照（水） - 18 μL - PCR 阳性对照（巨细胞病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀 释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间 预变性 93℃ 2 min PCR-1 反应 （10 个循环） 93℃ 45 sec 55℃ 60 sec PCR-2 反应 （30 个循环） 93℃ 30 sec 45℃ 60 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。2%琼脂糖电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。 预期的 PCR 产物长度为 86bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必 须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍 后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。