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猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)PCR试剂盒

Feline Parvovirus(FPV)
别名: 猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)PCR试剂盒
储存条件: 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。  
猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)PCR试剂盒
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猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)PCR试剂盒

英文名称:Feline Parvovirus(FPV)

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产品介绍:

产品及特点

猫细小病毒(Feline Parvovirus,FPV)是一种DNA病毒,又称为猫传染性肠炎病毒,会引起猫科动物之间的传染病,以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征,感染病毒后,病猫会迅速脱水,消瘦,眼窝深陷,被毛凌乱,皮肤无弹性,耳鼻,四肢发凉,精神高度沉郁,休克,死亡。从病初症状轻微到严重一般不超过2天,整个病程一般不超过一周,发病迅速,传播范围广,对猫科动物健康造成严重损害,因此猫细小病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 FCV 的 cDNA 模板(需要提前做逆转录)或 含有 FCV 前病毒 DNA 的样品。

2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增猫杯状病毒前病毒,与其他病毒没 有交叉反应。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果是提取的 FCV 的 RNA,则先逆转录得到 cDNA。本试剂盒不提供相 关试剂。

2. 如果是要提取前病毒 DNA,则用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试 剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。

3. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 猫 杯状病毒前病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得,样品制备阴性对 照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA(每个样品) 放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否则 PCR 抑制物很 可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR 反应(40μL 体系)

4. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分: 成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 猫杯状病毒前病毒 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 或预先制备的 cDNA 各 18 μL - - PCR 阴性对照(水) - 18 μL - PCR 阳性对照(猫杯状病 毒前病毒 PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液) - - 18 μL

5. 按下表设置 PCR 反应:

过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 (30 个循环) 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 30 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

6. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 920bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩 增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

 

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