单纯疱疹病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

单纯疱疹病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Herpes Simplex Virus(HSV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

单纯疱疹病毒（Herpes Simple Viruses， HSV）属于疱疹病毒科 a 病毒亚科， 为双股 DNA 病毒，疱疹病毒感染的宿主较为广泛，可感染人与其他脊椎动物，主要通 过接触传染。目前，根据抗原的不同把 HSV 分为 I 型和 II 型。HSV-II 型的原发感染 主要引起生殖器疱疹，一旦感染，患者将终身携带这种病毒并周期性地出现生殖器疱疹 性损伤，HSV-II 感染还会增加 HSV-II 传播的风险。此外，II 型病毒对田鼠细胞等有转 化作用，同时怀疑疱疹病毒与女性的宫颈癌有关。因此对 HSV-II 型的快速诊断具有重 要的意义。本产品就是针对此需求而建立的一种检测 HSV-II 型的 DNA 总含量的、高 灵敏的 PCR 检测方法，根据 HSV-II 型保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。本试剂盒具有下列特点：

1. 根据 HSV-II 保守区设计的针对 HSV-II 的 PCR 引物，专一性强。

2. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

3. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。 

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

运输及保存 低温运输、-20℃保存(A 袋和 B 袋的试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照最好分开放置)， 有效期一年。 

自备试剂 DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

使用方法 一、样品 DNA 的制备 

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本 试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分），

三、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供可以直接使用的长为 75bp 的 DNA 片段作为阳性对照。

3. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。

5. 先将本试剂盒提供的阳性对照用超纯水 10 倍梯度稀释到 10E8 拷贝/μL。放冰上 待用。 

6. 在 7 号管中加入 5 μL 10E8 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分 钟，得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分 震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 

8. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/ μL 的阳性对照。放冰上待用。

9. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，得 10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放 冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 

三、设置 PCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行） 

10. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后最后加）：

成分 样品 阴性对照 阳性对照（2-7 管） 2×qPCR Mix 10 μL 10 μL 各 10 μL 引物混合物 2 μL 2 μL 各 2 μL 自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL 待测样品 DNA 模板 1-5 μL 不加 不加 阳性对照（2-7 号） 不加 不加 各 5μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） 补水到 20 μL 20 μL 20 μL

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。 

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化）。

过程 温度 时间预变性 95℃ 10 分钟PCR 反应（45 个循环）95℃ 15 秒60℃ 1 分钟

12. 数据采集 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时， 最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光 谱在 530 nm。

四、数据处理

13. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品 浓度的 log 和标准曲线计算出样品 DNA 的浓度。