人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR试剂盒

人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR试剂盒

英文名称：Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1)

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产品介绍：

产品及特点

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV），即艾滋病（AIDS，获得性免疫缺陷综合征）病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。1981 年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），属逆转录病毒的一种。目前全球流行的主要是HIV-1。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测人免疫缺陷病毒 I型。它具有下列特点：

1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据人免疫缺陷病毒 I 型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 人免疫缺陷病毒 I型通用 PCR 阳性对照的 100 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装，

产品编号 61202 下载。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中

加入下列成分：

成份

N+2 个

样品管

RT-PCR

阴性对照

RT-PCR

阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

人免疫缺陷病毒 I 型通用 RT-PCR 引

物混合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - - 超纯水 - 12.5 μL - 人免疫缺陷病毒 I 型通用 RT-PCR 阳

性对照的 100 倍稀释液

- - 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 min

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 30 sec

54℃ 30 sec

72℃ 30 sec

延伸 72℃ 7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照有 169bp 的预期扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。