兔出血症病毒RT-LAMP试剂盒

兔出血症病毒RT-LAMP试剂盒

英文名称：Rabbit Hemorrhagic Disease Virus(RHDV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

兔病毒性出血症又名兔出血性肺炎、兔出血症和兔瘟。是由兔病毒性出血症 病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus，RHDV)所致的兔的一种急性、败 血性、高度接触传染性、致死性和以全身实质器官出血为主要特征的传染病。 因此建立新的简便易推广的兔出血症病毒检测方法具有重大的意义。为此本公 司开发了简单快捷的兔出血症病毒 RT-LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA。

2. 用 RT-LAMP 恒温扩增法扩增兔出血症病毒特异片段，不需要荧光 PCR 等 贵重仪器。同时扩增时间只需要 1h，尤其适合现场或实验条件简陋的单位 使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对兔出血症病毒保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。

7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。兔出血症病毒 RT-LAMP 阳性对照 最好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂 盒兼容，包括本公司的一管式病毒 RNAout 或其升级版柱式病毒 RNAout。 

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对 照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μL 兔出血症病毒 RT-LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备 阴性对照是直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个样品一起进行 RNA 提取操作，得到 N+2 个 RNA 样品。

二、RT-LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 RNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 RT-LAMP 扩增，增加 RT-LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中 加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 RT-LAMP 阴性对照管 RT-LAMP 阳性对照管

2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 各 10 μL 10 μL 10 μL

兔出血症病毒 RT-LAMP 引物混合液 各 4 μL 4 μL

N+2 个样品 DNA 各 6 μL - - RT-LAMP 阴性对照（水） 6 μL

RT-LAMP 阳性对照（兔 出血症病毒RT-LAMP 阳 性对照的 10000 倍稀释 液） - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反 应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反 应后比对。

5. 置于 25℃ 5 min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩 增 60-120 min（如果不使用 Loop 引物，则最好保温 2h）。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水 以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50μL 石蜡油，否则保温期间反 应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

6. 80℃10min 灭活 Bst 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照 相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳 性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品）：

9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL RT-LAMP 扩增产物直接进 行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 Loading Buffer），最好使 用 100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典 型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号 和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）。

10. 注意消除环境污染，RT-LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一 次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的 其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix 被污染。