小鼠线粒体DNA通用PCR试剂盒

小鼠线粒体DNA通用PCR试剂盒

英文名称：Mouse mtDNA PCR Kit

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

线粒体是真核生物产生能量的重要细胞器，它具有自身的基因组，线粒体DNA 和细胞核 DNA 共同决定真核生物的表现型，因此研究线粒体 DNA 具有重要的意义。本试剂盒基于 PCR 原理开发，可用于分析小鼠线粒体 DNA，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增小鼠线粒体 DNA，但无交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其

他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品DNA的制备

1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送30次DNA释放剂试用装。

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个阳性对照和一个阴性对照。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL牦牛源性成分阳性对照2.0作为阳性对照，阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行病毒DNA提取操作。

二、LAMP（20μL体系）

3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+3个LAMP扩增，增加一个不加引物的阴性对照。在N+3个PCR管中加入下列成分：

成分 样品管

N个 无模板

阴性对照 无引物

阴性对照 阳性对照

LAMP

MagicMix 各10 μL 10 μL 10 μL 10 μL

牦牛源性成分

LAMP引物Mix 各4 μL 4 μL - 4 μL

样品DNA模板 各6 μL - - -

阴性对照（纯化后） - 6 μL - -

自备超纯水 6 μL

阳性对照（纯化后） - - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常淡的蓝色，用手机在白色背景前照相留底。

5. 置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

6. 反应结束后将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

7. 实验结果分析。阳性对照将呈现淡蓝色，无模板和无引物阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9号为阴性，10号为阳性，此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品）：

8. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取10μL LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），最好使用100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为200bp的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）：