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Z950307 V8蛋白酶, 500 u/mg

Glu-C
别名: 谷氨酰胺内切酶;天冬酰胺内切酶
Cas号: 66676-43-5  
分子量: 24.0±2.4 kDa  
储存条件: -20°C  
Z950307 V8蛋白酶, 500 u/mg
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产品描述:

V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。

在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键;

在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。

V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。

使用方法:

1)使用前注意
可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18 h。

 

表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)

变性剂 浓度 残余酶活
不添加 0 100%
尿素 2M 95%
5M 12%
8M 0
SDS 0.1% 90%
0.5% 80%
1% 50%
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