柱式细菌DNAout

柱式细菌DNAout

英文名称：Column Bacterial DNAOUT

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

柱式法提取革兰氏阴性和阳性细菌的DNA

产品及特点

本产品是在基因在天净沙细菌 DNAOUT 基础上开发的柱式升级产品，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组 DNA 的快速提取。

1. 操作简单，整个过程不到 20 分钟。

2. 产率一般在 5-20 ug/mL 过液培养的饱和菌液（108-109个细胞）。

3. OD260/280 一般在 1.8 以上，可直接用于 PCR、酶切、杂交等实验。

4. DNA 片段长度一般在 40-50 Kb 左右。

5. 每次提取可以处理 0.1-1.5 mL 的细菌，也可以使用菌落。

6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

7. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

运输及保存 常温运输及保存（溶菌酶干粉需要 4℃或-20℃保存），有效期一年。 

自备试剂 氯仿、自备无菌水。

使用方法注意：溶液 A 和溶液 B 容易产生沉淀，溶液 B 十分粘稠，均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

一: 对革氏阴性细菌样品， 不需用溶菌酶

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的菌液转移到 1.5 mL 塑料离心管中， 12,000 rpm室温离心 1 分钟沉淀细菌，弃上清。

2. 加入 300 uL 预热的溶液 A 到细菌沉淀中，充分吹打均匀。

3. 再加入 150 uL 预热的溶液 B 到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液 B 比较粘稠，可以采取称量方法取用，150uL 约等于 150-160 mg。也可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取。

4. 65℃放置 3-5 分钟。如果室温放置，DNA 产量会降低 10-20%。

5. 加入 200 uL 自备氯仿，震荡混匀 10-30 秒，此时溶液将呈乳白色。

6. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5 mL 塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。

7. 加入 1.5 倍体积(约 0. 7 mL)的溶液 C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少 2 分钟。

8. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。

9. 将 0.5 mL 通用洗柱液加入离心柱中，12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃穿透液。

10. 重复上步操作一次。

11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的 1.5 mL 离心管中。

12. 加 50-100 uL 通用洗脱液，室温放置 3-5 分钟。

13. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟即得 DNA 溶液。

14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附 DNA 的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的 DNA。

15. 直接取 5-10 uL 电泳检测 DNA，其余放冰箱备用。

二: 对革氏阳性细菌样品，需用溶菌酶

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的革氏阳性细菌 12,000 rpm 室温离心 1 分钟后, 重悬于 0.6 mL 溶菌液中（溶菌液配制:30 mL 无菌水+600 mg 溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀 5-10 次后放 37℃保温至少 30 分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。

2. 12,000 rpm 室温离心 10 分钟，小心弃上清。

3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第 2 步。

三: 其他注意事项

1. 可以直接使用细菌菌落提取 DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液 A 中，后续操作同上。

2. 从单个菌落中提取到的 DNA 较少，所以只用 30 uL 通用洗脱液洗脱。