一步法无内毒素质粒DNAout

一步法无内毒素质粒DNAout

英文名称：One-Step Endo-free Plasmid DNAOUT

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

产品及特点

本产品是在分枝杆菌DNAOUT（CAT#:70702）基础上开发的柱式升级 产品，具有下列特点：从水体中提取高纯度的基因组DNA是水体环境监测非常重要的手段，但是由于水 体样品存在腐殖酸、金属离子等PCR抑制剂，从水样中提取DNA一直比较棘手。为 解决此问题，本公司利用在核酸纯化领域的丰富经验和先进的纯化技术开发了本产 品，它具有下列特点：本产品是整合土壤DNAOUT（CAT#：60701）和柱式腐殖酸清除剂 （CAT#：60801）两个产品而得的柱式升级产品，它结合了两者的优点，专门用 于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。本产品是在天净沙细菌DNAOUT基础上开发的柱式升级产品，可以用 于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。本产品是在一步裂解式质粒DNAOUT（CAT#：70903）基础上开发的、 能够快速从100 mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即 可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质 粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是： 1. 快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。本产品是在一步式质粒DNAOUT（CAT#：70301）基础上开发的、能够 从单个菌落快速提取质粒DNA的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到可以用常 规电泳方法检测得到的质粒DNA是由于一步式细菌裂解技术能够使细菌释放出其几 乎所有的质粒DNA。本产品是整合一步式质粒DNAOUT（CAT#:70903）和菌体内毒素清除 剂（CAT#:90901）两产品而成。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度 低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
此产品的特点是：
1. 独家推出的先去除菌体内毒素，再提取质粒DNA的策略，从根本上避免了内毒 素污染DNA的可能。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3. 使用灵活，质粒提取和内毒素清除两个操作相互独立。
4. 质粒回收率高，一次处理后90%的质粒DNA可以回收回来。
5. 得到的质粒DNA可以直接用于转染等实验。

运输及保存 常温运输及保存(溶液 A 最好 4℃保存)，有效期一年。

自备试剂 无

使用方法 

一: 菌体内毒素的清除

1. 收集 1.5-3 mL E.coli 饱和菌液，12000 rpm 离心 1 分钟，弃上清，得到细菌沉。

2. 在沉淀中加入 1 mL 菌体内毒素清除剂，温和混匀后 10000-12000 rpm离心 1 钟，弃上清（含内毒素）。

3. 再重复上述操作 3 次，得到的菌体沉淀可以直接进入下面的一步法质粒DNA 提操作。

二：一步法质粒 DNA 提取

4. 在菌体沉淀中加入 0.6 mL 溶液 A(用前需摇匀)，充分吹打或振荡 30 秒裂解细菌，直到裂解液变澄清（一般需要半分钟左右）。注:此方法丌同于碱裂解法，故可以充分吹打或振荡。

5. 活化离心吸附柱：在离心吸附柱中加入 0.5 mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置 2 分钟，然后 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果丌活化，质粒得率将低 20-40%左右。

6. 将第 4 步得到的裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟使质粒DNA 不膜结合。注意：必须静止 2 分钟，否则质粒 DNA 丌容易吸附上。

7. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

8. 在离心吸附柱中加入 0.6 mL 的通用预洗液(注意:是通用预洗液，丌是通用洗柱液，丌要用错。通用预洗液非常容易产生沉淀，用前需要加热到 60℃左右使之融化，混匀后再用)，室温 12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

9. 在离心吸附柱中加入 0.6 mL 的通用洗柱液，室温 12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

10. 在离心吸附柱中加入 0.4 mL 的通用洗柱液，室温 12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。

11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。

12. 将离心柱置于一个新的 1.5 mL 自备塑料离心管中，加入 30-100 uL DNA洗脱液 2.0，室温放置 2 分钟。

13. 12000-15000 g 离心半分钟，离心管底溶液即无内毒素质粒 DNA。