柱式凝固血液DNAout

柱式凝固血液DNAout

英文名称：Column Blood Clot DNAOUT

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

产品及特点

柱式法提取应为没有抗凝剂而凝固的血液DNA

产品及特点 

本产品是在基因凝固血液 DNAOUT（CAT#:71002）基础上改进的柱式升级产品，专门用于从新鲜或冻存的凝固全血(包括人和禽类)中提取基因组 DNA。跟凝固血液 DNAOUT 相比，它具有下列特点:

1. DNA 更加纯净，OD260/280 在 1.8-2.0 之间，可直接用于 PCR、酶切、杂交等。

2. 操作更加简单快捷，比凝固血液 DNAOUT 快十分钟以上。

3. 每克新鲜凝固全血 DNA 产量为 20-50 ug DNA。

4. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。 

自备试剂 氯仿

使用方法 

1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取 1 mL 到 10 -15 mL 塑料离心管中并将离心管放置于 65℃待用。

2. 称取凝固血液 0.1-0.5 g，加入到预热的溶液 A 中短暂匀浆（必须使用剪切式匀浆机）。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。注意：如果是干的血块，用量不要超过 0.2 g，但需将干血块剪成微小的碎片。也可以将凝固血块液氮研磨成粉后转移到装有溶液 A 的离心管中。

3. 将匀浆液置于 65℃水浴保温 5 分钟，然后将不超过 0.75 mL 的匀浆液上清转移到新的 1.5 mL 离心管中。注意：尽量不要转移凝固血液碎片。

4. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀。

5. 冰浴 5 分钟。

6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清液转移到新的 1.5 mL 离心管中。

7. 在上清中加入 0.2 mL 的自备氯仿，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。

8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，两相交界面将有白色膜状物。

9. 将上清液（大约 0.6 mL）小心转移到新的 1.5 mL 离心管中。

10. 在上清液中加入 1.5 倍体积的溶液 C，上下颠倒 30 秒混匀。

11. 分两次将混合液转移到离心吸附柱中，每次转移后需要 12000-15000 g 离心半分钟并弃穿透液。

12. 在离心吸附柱中加入 0.7 mL 的通用洗柱液，12000-15000 g 离心半分钟。

13. 在离心吸附柱中加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000 g 离心半分钟（此步为第二次洗涤，一般可以省略）。

14. 12000-15000 g 离心半分钟以去除残留通用洗柱液。注意：此步不能省略，否则残留的通用洗柱液会影响 DNA 的后续反应。

15. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入 30-100 uL DNA 洗脱液 2.0，12000-15000 g 离心半分钟，管底溶液即 DNA 溶液，可立即使用或放冰箱长期保存。