NP40 Lysis Buffer（NP40裂解液）

NP40 Lysis Buffer（NP40裂解液）

英文名称：NP-40 Lysis Buffer

运输：常温

保存：4-25℃

有效期：2年

货期：1-3天

其他： 

产品介绍：

产品及特点

NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。 NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 和 co-IP 等。本产 品具有下列特点：

1. 本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。

2. 本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。

3. 本产品的主要成分为 50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40 以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin 等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

4. 用 NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 PMSF

使用方法 对于培养细胞样品：

1. 融解 NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF， 使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中 的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150--250 微升裂解液的比例加 入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒 后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150--250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂 解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然 后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够，但如果细 胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解 NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

3. 按照每 20 毫克组织加入 150--250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。