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酿酒酵母EBY100菌种

Saccharomyces cerevisiae EBY100
别名: 酿酒酵母EBY100菌种
储存条件: 低温运输,-80℃保存,有效期一年。  
酿酒酵母EBY100菌种
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ZY-12-198y -1 mL 1 mL 现货 990.00 990
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酿酒酵母EBY100菌种

英文名称:Saccharomyces cerevisiae EBY100 

运输:低温

保存:-80度

有效期:3年

货期:现货

其他: 

产品介绍:

产品及特点

EBY100 是酿酒酵母菌株,属于真核细胞,具有氨苄和卡那霉素抗性。 质粒转化条件为电转化,应用于酵母表面展示。此菌株必须生长在营养丰富的 培养基中,例如 YPD 培养基,无法在 minimal media 中生长。在 GAL1 启 动子的作用下,此菌株能够表达 AGA1 基因。EBY100 的配套载体是 pYD1 载体。此菌株的基因型如下:MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200 pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)

运输及保存 低温运输,-80℃保存,有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、TE 缓冲液(pH 7.5)、乙酸锂、DTT、山梨醇、超纯水等

使用方法 本手册提供一个质粒转化酵母的电转化方法,供参考。

一、感受态细胞制备 

1. 挑一环酵母菌接种于 5 mL YPD 培养基中,30℃、250-300 rpm 培养过夜;

2. 取适量的过夜培养液分别接种于两瓶 50 mL YPD 培养基中,30℃、250-300 rpm 培养约 16-18 小时(OD:1.3-1.5);

3. 于 4℃,4000 g 离心收集菌体,用 25 mL 冰浴的无菌水洗涤一次后,细胞用 10 mL 冰浴的无菌水重悬,可换成较小的离心管;

4. 加入 1 mL 的 10×TE 缓冲液(pH 7.5),摇晃均匀,再加入 1 mL 10×乙酸锂,旋转摇匀,于 30℃轻轻摇动 45 分钟;

5. 再加入 0.4 mL 1 mol/L DTT,并同时旋转摇动,于 30℃轻轻摇动 15分钟;

6. 于 4℃,4000-6000 g 离心,弃上清(用枪吸),再用 25 mL 冰浴的无菌水洗涤后 4℃离心,收集菌体;

7. 用 2.5 mL 冰冷的 1 mol/L 山梨醇重悬细胞,离心收集菌体,弃上清(用枪吸);

8. 每管用 100 uL 1 mol/L 的山梨醇溶解,分装于 EP 管中(80 uL/管),于-70℃冰箱保存。

二、电转化

1. 向感受态细胞中加入约 5~10 ug(体积小于 10 uL)的 DNA,用枪吹吸均匀,转移至预冷的电转杯中,静置 5 分钟;

2. 擦干电转杯,电击,电击参数:1.5 KV,25 uF,200 欧姆(详细请参考电穿孔仪的说明书);

3. 立即加入 1 mL 预冷的 1 mol/L 山梨醇,轻轻吹吸混匀,转移至 EP 管中,于 30℃静置 1 小时;

4. 离心,弃上清,加入 1 mL YPD 后,于 30℃、200 rpm 培养 2 小时;

5. 离心得菌体后,吸除 550 uL 上清液,然后按 150 uL/板在相应的选择培养基平板,于 30℃培养 3-6 天,直到平板上出现菌落。(注:酿酒酵母适宜的生长温度是 30℃,温度超过 32℃可能导致细胞的死亡。)

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