禽类支原体通用PCR试剂盒

禽类支原体通用PCR试剂盒

英文名称：Avian Mycoplasma spp

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

禽支原体病是由禽类支原体（Avian Mycoplasma spp.）引起的家禽的一 种传染病，主要包括鸡败血支原体病、鸡传染性滑液膜炎和火鸡支原体病。禽 支原体病几乎在世界各地都有发生，已成为鸡群和火鸡群的一个重要问题。危 害的鸡只达 13%以上，使其体重减少 38%，饲料转化率降低 21%。在火鸡中， 可引起窦炎、气囊炎和以高死亡率为特征的传染性窦炎。本试剂盒是根据 PCR 原理开发，具有下列特点：

1. 免 DNA 制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。

2. 根据禽类支原体保守区设计引物。

3. 特异性高，跟其他微生物无交叉反应。

4. 灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照（DNA 片段），能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。

6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。

7. 本产品足够至少 50 次 40μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反应)。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸纯化试剂盒兼 容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的 裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照管 PCR 阳性 对照管 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 禽类支原体通用 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - PCR 阴性对照（超纯水） - 18 μL - PCR 阳性对照（禽类支原体通用 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应： 过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 60 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。