禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)

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产品介绍：

产品及特点

网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒（Reticuloendotheliosis Virus，REV）引起的一种肿瘤性传染病，病鸡表现为贫血、消瘦，生长缓慢等。病理解剖特点是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎缩，腺胃炎。本病能侵害机体的免疫系统，可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本产品就是专门用于 REV 的RT-PCR 检测的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。

3. 引物根据 REV 病毒保守的 LTR 序列设计，不与其他病毒发生交叉反应。

4. 使用两步式 RT-PCR，先做 RT 再做 PCR，操作更加灵活。

5. 本试剂盒灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

6. 本试剂盒足够 50 次 20 μL 体系的 RT 反应，50 次 40 μL 体系的 PCR 反应。

7. 本产品只用于科研

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到试剂盒后最好请将阳性对照放置到专 门区域，因为其含有较高浓度的扩增产物，容易污染其他试剂。

自备试剂 样品 RNA。

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 试剂盒提供的阳性对照再加上一定 量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用 试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。使用本阳性对照时，由于其浓度较 高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。必须在专门的区域操作。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂 盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次 RNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 RNAout 的 成分），

二：设置 RT 反应

3. 如果有 N+2 次 RNA 提取，则按照下表设置 N+2 个 RT 反应体系（20 μL 体系）： 成份 用量 RNA 模板（自备） 1-10 μL 即可 网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合液 2 μL 超纯水 补水到 14 μL RT Buffer(含 dNTP) 5 μL MMLV（含 RI） 1 μL

4. 42℃保温 60 min，70℃保温 10 min 以终止反应，然后放置在冰上待用。此为 cDNA 样品。 三、设置 PCR 反应

5. 对 N+2 个 cDNA 样品，则在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分（多的一个是 PCR 阴 性对照，一个是 PCR 阴性对照）： 成分 N+2 个样品 PCR 阴性对照 PCR 阳性对照 PCR MagicMix 3.0 20 μL 20 μL 20 μL 网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合物 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个 cDNA 样品 5 μL 不加 不加 网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 阳性对照 不加 不加 1 μL 补超纯水到 40 μL 40 μL 40 μL

6. 上机进行 PCR，PCR 反应参数为： 过程 温度 时间 逆转录 42℃ 60 min 预变性 94℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 0.5 min 55℃ 0.5 min 72℃ 0.5 min 最后延伸 72℃ 10 min 20190323dx

7. 取 10uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为 220 bp。 阳性对照必须出现 220bp 的 PCR 产物，否则 RT-PCR 体系有问题，需要寻找原因。 如果阴性对照出现 220bp 的 PCR 产物，则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污 染，需要把样品制备和 PCR 反应后电泳充分隔离进行。如果发生了污染，则需要另 外设计引物，本试剂盒提供的引物和阳性对照将不可用。