幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR试剂盒

幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR试剂盒

英文名称：Bacillus larvae

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产品介绍：

产品及特点

幼虫芽孢杆菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼虫腐臭病（Americanfoul brood）的病原。美洲蜂幼虫腐臭病又名烂子病，是蜜蜂幼虫和蛹的一种细菌性、急性、毁灭性病害。特征为病蜂的蜂盖子脾下陷、穿孔、封盖幼虫死亡、蛹虫现象等。美洲蜂幼虫腐臭病最初发生于英国，以后传到欧美各国，截止至 2011 年全世界均有发生。美洲蜂幼虫腐臭病但危害性大，而且一旦发生就很难根除。轻者影响蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆灭，因此幼虫芽孢杆菌快速检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增幼虫芽孢杆菌，跟其他微生物无交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其

他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

幼虫芽孢杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（幼虫芽孢杆

菌阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

94℃ 15 sec

58℃ 15 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 1106bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。