牛腺病毒通用PCR 试剂盒

牛腺病毒通用PCR 试剂盒

英文名称：Bovine Adenovirus(BAV)

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产品介绍：

产品及特点

牛腺病毒(Bovine Adenovirus，BAV)会引起牛的呼吸道疾病和肠道疾病，主要特征为肺炎、肠炎、结膜炎和多发性关节炎，是牛犊死亡的重要原因之一，其易感染性和潜伏性给畜牧业以及国际贸易带来严重的经济损失，因此牛腺病毒通用的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，本产品具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增猴病毒40，与其他病毒没有交叉反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。猴病毒40PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品DNA。

使用方法 一、样品DNA的制备

1.用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送15次核酸释放剂试用装

2.如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在200μL水中加10μL 猴病毒40PCR阳性对照的10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用200μL水。提取结束后最后得到200μL模板DNA（每个样品）放冰上待用，溶解DNA沉淀的溶液不能少于200μL，否则PCR抑制物很可能会抑制PCR。

二、设置PCR反应（40μL体系）

3.对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各20 μL 20 μL 20 μL

猴病毒40PCR引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL

N+2个样品DNA模板 各18 μL - -

PCR阴性对照（水） - 18 μL -

PCR阳性对照（猴病毒40PCR阳性对照的10000倍稀释液） - - 18 μL

4.按下表设置PCR反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR反应

（35个循环） 95℃ 45 sec

54℃ 45 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5.取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为319bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。