牛疱疹病毒1型PCR试剂盒

牛疱疹病毒1型PCR试剂盒

英文名称：Bovine Hepervirus 1 (BHV-1)

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产品介绍：

产品及特点

牛疱疹病毒 1 型（Bovine herpesvirus 1，BoHV-1）引起牛的传染性鼻气管炎，又称坏死性鼻炎、红鼻病，表现上呼吸道及气管黏膜发炎、呼吸困难、流鼻汁等症状，BHV-1 还可引起生殖道感染、结膜炎、脑膜脑炎、流产、乳房炎等多种病症。该病被 OIE 列为 B 类传染病，也被我国列为二类动物传染病，其易感染性和潜伏性给畜牧业以及国际贸易带来严重的经济损失，因此牛疱疹病毒 1 型的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛疱疹病毒 1 型 DNA，与其他病毒没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。牛腺病毒 PCR 阳性对照需要单独放 置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 牛腺病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性对照

PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

牛疱疹病毒 1 型 PCR 引

物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（牛疱疹病

毒 1 型 PCR 阳性对照的

10000 倍稀释液）- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 45 sec

54℃ 45 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 319bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。