布鲁氏杆菌属通用可视化LAMP试剂盒

布鲁氏杆菌属通用可视化LAMP试剂盒

英文名称：Brucella spp.

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

 布鲁氏杆菌属（Brucella spp.）是一种细胞内寄生小球杆状菌，革兰氏染色 阴性，主要感染动物，牛、羊、猪、狗以及骆驼、鹿等动物，它通过接触感染 的动物或者吃被感染的食物以及实验室接触等方式传播给人类。能引起人和多 种动物的急性和慢急性疾病，被感染的人和动物表现为流产及不孕不育等症状， 因此布鲁氏杆菌属通用的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为 此本公司开发了简单快捷的布鲁氏杆菌属通用可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 样品。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增布鲁氏杆菌特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对布鲁氏杆菌保守基因的特异引物，比使用 2条引物的 PCR 专一性更高。

5. 可视化，由于 LAMP 中含可视化染料，扩增后可以在不开盖的条件下直接肉眼观察结果，减少对仪器设备的依赖和对后续实验的污染。

6. 整合 UNG-dUTP 防污染系统，可以防止实验污染这一非常棘手的问题（尤其在实验条件不规范的场合）。

7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

8. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。布鲁氏杆菌阳性对照 2.0 最好单独

放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式 DNAout 或其升级版柱式 DNAout。本试剂盒免费赠送 30 次 DNA 释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μL 布鲁氏杆菌阳性对照作为 PC。直接用 X mL 水作为 NC，然后和 N 个样品一起进行 DNA提取操作。

二、LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加一个 LAMP 阴性对照和 LAMP 阳性对照。在冰上操作，于 N+2个 PCR 管中加入下列成分：成分

N+2 个样品管

阴性对照管

阳性对照管

2×可视化 UNG-LAMP

MagicMix

各 10 μL 10 μL 10 μL

布鲁氏杆菌属通用可视化

LAMP 引物混合液 各 4 μL 4 μL 4 μL

N+2 样品 DNA 模板 各 6 μL - -

LAMP 阴性对照（水） - 6 μL -

LAMP 阳性对照 - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。注意阴性对照加好后，及时封盖，再添加阳性模板和样品，防治污染。

5. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放65℃扩增60分钟（如果不使用Loop引物，则最好保温2小时）。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

6. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。

7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：

9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为 200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：

10. 加样与反应需在不同房间进行，并且在反应完成后，及时利用紫外清理气溶胶，防止产生污染影响下一次实验。