牛布鲁氏杆菌PCR试剂盒

牛布鲁氏杆菌PCR试剂盒

英文名称：Brucella bovis

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

牛布鲁氏菌(Brucella bovis，又叫Brucella abortus) 又叫流产布氏杆菌， 是一种革兰氏阴性的不运动细菌，无荚膜(光滑型有微荚膜)，触酶、氧化酶阳性， 绝对嗜氧菌，可还原硝酸盐，细胞内寄生，可以在牛体内存活，也能引起人类 疾病。一头奶牛如果感染布鲁氏杆菌，没有得到及时的清洁和防疫，布病很快 会在牲畜群体里暴发，进而增加人被感染的几率。其特点是生殖器官、胎膜及 多种器官组织发炎、坏死和肉芽肿的形成，引起流产、不孕、睾丸及关节炎等 症状。感染人后可能导致多个器官或脏器系统，骨骼或关节的病变，感染组织 中可观察到具有组织学特征的肉芽肿。晚期可能失去劳动能力、卧床不起、出 现神经或精神病方面的症状。因此牛布鲁氏菌的检测具有重要的意义。本试剂 盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特点： 

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增犬布鲁氏杆菌。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 细菌 DNA 提取试剂盒

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可

以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

犬布鲁氏杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - 样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL - 样品制备阳性对照（犬布鲁氏杆菌

阳性对照的 100 倍稀释液）

- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 15 sec

58℃ 15 sec

72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 526bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。