产肠毒素性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）PCR试剂盒

产肠毒素性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）PCR试剂盒

英文名称：Enterotoxigenic E.coli(ETEC)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic E.coli，ETEC）是一类引起人和 幼畜（初生仔猪、犊牛、羔羊及断奶仔猪）腹泻的重要病原菌，初生幼畜被 ETEC 感染后，常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡，发病率和死亡率均很高。据估 计，国内约有 35%的仔猪腹泻是由 ETEC 引起的，美国等国家新生仔猪腹泻 中，由 ETEC 引起的占 45%以上，给养殖业带来严重的经济损失。因此产肠 毒素性大肠杆菌检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下 列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增产肠毒素性大肠杆菌。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 50 次免 DNA 提取的DNA 释放剂，本产品的裂解液 可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 产肠毒素性大肠杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - 样品制备阴性对照 - 18 μL - 样品制备阳性对照 - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 30 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照 必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增 产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。