大肠杆菌通用PCR试剂盒(含致病性和非致病性)

大肠杆菌通用PCR试剂盒(含致病性和非致病性)

英文名称：E.coli

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

大肠杆菌（Escherichia coli）为埃希氏菌属（Escherichia）代表菌。一 般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。 但某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌，又叫致泻性 大肠杆菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）根据致病性的不同，这 些致泻性大肠埃希菌被分为五种。检测致病性和非致病性大肠杆菌是食品行业 （包括饮用水）的一个重要的安全指标，因此快速检测致病性和非致病性大肠 杆菌具有重要意义。本试剂盒就是为此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特 点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增大肠杆菌。但跟非大肠杆菌无交叉 反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分N+2 个样品管PCR 阴性对照PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

大肠杆菌通用 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（大肠杆菌通

用阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 minPCR 反应（35 个循环）

95℃ 15 sec56℃ 15 sec72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 272bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。