产肠毒素性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）PCR试剂盒

产肠毒素性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）PCR试剂盒

英文名称：Enterotoxigenic E.coli(ETEC)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic E.coli，ETEC）是一类引起人和 幼畜（初生仔猪、犊牛、羔羊及断奶仔猪）腹泻的重要病原菌，初生幼畜被 ETEC 感染后，常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡，发病率和死亡率均很高。据估 计，国内约有 35%的仔猪腹泻是由 ETEC 引起的，美国等国家新生仔猪腹泻 中，由 ETEC 引起的占 45%以上，给养殖业带来严重的经济损失。因此产肠 毒素性大肠杆菌检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下 列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增大肠杆菌。但跟非大肠杆菌无交叉 反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分N+2 个样品管PCR 阴性对照PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

大肠杆菌通用 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（大肠杆菌通

用阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 minPCR 反应（35 个循环）

95℃ 15 sec56℃ 15 sec72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 272bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。