埃希氏菌属通用PCR试剂盒

埃希氏菌属通用PCR试剂盒

英文名称：Escherichia spp.

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

埃希氏菌属（Escherichia spp.）包括大肠埃希氏菌,即埃希氏菌属通用 (Escherichia coli)、伤口埃希氏菌(Escherichia vulneris)、弗格森埃希氏菌 (Escherichia fergusonii)、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermanii)和塞内加尔 埃希氏菌(E .senegalensis)等菌种, 是动物肠道正常菌群之一，但在某些条件 下, 如机体防御机能降低或滥用抗生素等, 此菌可进入机体的其他部位引起感 染。以往对肠道菌群的研究主要依赖对肠黏膜和粪便细菌的分离培养鉴定, 可 以分离的细菌种类有限，因此快速灵敏检测埃希氏菌具有重要的意义，本试剂 盒就是为此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增大肠杆菌。但跟非大肠杆菌无交叉 反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分N+2 个样品管PCR 阴性对照PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

大肠杆菌通用 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（大肠杆菌通

用阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 minPCR 反应（35 个循环）

95℃ 15 sec56℃ 15 sec72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 272bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。