口蹄疫病毒通用RT-PCR试剂盒

口蹄疫病毒通用RT-PCR试剂盒

英文名称：Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)

运输： 低温

保存： -20℃

有效期： 一年

货期： 2-4周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)会引发口蹄疫，最易 感染的动物是黄牛等；野生动物也易感染此病。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及 南美均有流行，口蹄疫发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱， 高烧不退，使实际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可传染给人。因 此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、 难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”，因此快速灵敏诊断具有 重要意义。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测口蹄疫病毒。 它具有下列特点：

1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据口蹄疫病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用口蹄疫病毒通用 PCR 阳 性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对 照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴性对照 RT-PCR 阳性对照 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL 口蹄疫病毒通用 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - - 超纯水 - 12.5 μL - 口蹄疫病毒通用 RT-PCR 阳性对照 的 1000 倍稀释液 - - 12.5 μL MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间 逆转录 42℃ 30 min 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 58℃ 30 sec 72℃ 30 sec 延伸 72℃ 7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果。预期的 PCR 产物长度为 328bp。如果有预期扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。