人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒通用PCR试剂盒

人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒通用PCR试剂盒

英文名称：Human T-cell Lymphoma Virus Provirus 

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产品介绍：

人类嗜 T 淋巴细胞病毒(Human T-cell Lymphoma Virus，HTLV)是一种致瘤性 RNA 病毒，属慢病毒亚科，可分为Ⅰ型和Ⅱ型。近来发现该病毒在人类可引起多种疾病:Ⅰ型可引起成人 T 细胞白血病/淋巴瘤、热带痉挛性截瘫以及其他具有相关性的脊髓病等;Ⅱ型与 T-多毛细胞/巨粒细胞白血病等疾病相关，两类病毒都会对人体健康造成严重损害，因此检测人类嗜 T 淋巴细胞病毒DNA 具有重要意义。本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增人多瘤病毒 7，与其他病毒没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。人多瘤病毒 7 PCR 阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 人多瘤病毒 7 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性

对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分N+2 个样品管PCR 阴对照PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

人多瘤病毒 7PCR 引物

混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（人多瘤病毒 7 PCR 阳性对照的10000 倍稀释液）- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间预变性 95℃ 5 min

PCR 反应（35 个循环）95℃ 15 sec54℃ 15 sec72℃ 10 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 112bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。