牛传染性鼻气管炎病毒PCR试剂盒

牛传染性鼻气管炎病毒PCR试剂盒

英文名称：Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus(IBRV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus, IBRV)会引起牛传染性鼻气管炎病毒，又称“坏死性鼻炎”、“红鼻病”，是 一种牛呼吸道接触性传染病。临床表现形式多样，以呼吸道为主，伴有结膜炎、 流产、乳腺炎，有时诱发小牛脑炎等。毒常常经上呼吸道粘膜、生殖道粘膜侵 入，还可经眼结膜上皮和软壳蜱侵入，是否经口腔感染仍未证实。经上呼吸道 入侵的病毒沿粘膜、神经纤维、淋巴管扩散到邻近部位引起上呼吸道炎症、结 膜炎，对养殖业造成较大经济损失，因此牛传染性鼻气管炎病毒的快速准确鉴 定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛传染性鼻气管炎病毒，与其他病 毒没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 阳性对 照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 牛 传染性鼻气管炎病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性 对照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个样 品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑制 物很可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（超纯水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（牛传染性 鼻气管炎病毒 PCR 阳性 对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 57℃ 30 sec 72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 5 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 112bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。