锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR试剂盒

锦鲤疱疹病毒Sph基因PCR试剂盒

英文名称：Koi Herpesvirus(KHV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus），简称 KHV。因其主要是由 DNA 类疱 疹滤过性病毒感染所引起，又名鲤鱼肾炎及鳃坏疽病毒，亚洲地区于 2004 年 也被报导感染锦鲤疱疹病毒。我国将其列为二类动物疫病，是世界动物卫生组 织（OIE）必须申报的疾病。因此对锦鲤疱疹病毒进行快速灵敏的诊断具有重 要的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，针对聚合酶基因 (Sph)进行 PCR 检测.它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增锦鲤疱疹病毒 Sph 基因。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以 此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的病毒 DNAout 或柱式病毒 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

锦鲤疱疹病毒 Sph 基因 PCR 引物 混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（锦鲤疱疹病毒 Sph 基因阳性对照的 100 倍稀释 液） - - 18 μL

4. 按下表设置PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 63℃ 15 sec 72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 526bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。