单核细胞增生李斯特菌PCR试剂盒

单核细胞增生李斯特菌PCR试剂盒

英文名称：Listeria monocytogenes

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)属乳酸杆菌科，为革兰氏阳性小杆菌，可以污染食品，导致李斯特病的发病率日趋上升，临床表现主要有脑膜炎、败血性肉芽肿、淋巴结肿大等。本病遍及世界各地，是人畜共患的传染病。人类感染有增多趋势，特别是新生儿、老年人、孕妇及免疫功能低下者易感性更高。对食品中的单增利斯特菌做出快速的检测和鉴定，是预防利斯特病的有效方法，因此单核细胞增生李斯特菌的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本试剂盒根据荧光定量PCR原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增伊氏李斯特菌。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品DNA。

使用方法 一、样品DNA的制备

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。

二、设置PCR反应（40 μL体系）

3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各20 μL 20 μL 20 μL

伊氏李斯特菌 PCR引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL

N+2个样品DNA模板 各18 μL - -

样品制备阴性对照 - 18 μL -

样品制备阳性对照 - - 18 μL

4. 按下表设置PCR反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR反应

（35个循环） 94℃ 20 sec

50℃ 20 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为208bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。