李斯特菌通用PCR试剂盒

李斯特菌通用PCR试剂盒

英文名称：Listeria spp.

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

李斯特菌(Listeria spp.)是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门，取名自约瑟夫•李斯特。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源性病原体之一，感染后健康成人可出现轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、孕妇出现流产，给人体健康带来较大的损害，因此李斯特菌的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本试剂盒根据荧光定量PCR原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增伊氏李斯特菌。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品DNA。

使用方法 一、样品DNA的制备

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。

二、设置PCR反应（40 μL体系）

3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各20 μL 20 μL 20 μL

伊氏李斯特菌 PCR引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL

N+2个样品DNA模板 各18 μL - -

样品制备阴性对照 - 18 μL -

样品制备阳性对照 - - 18 μL

4. 按下表设置PCR反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR反应

（35个循环） 94℃ 20 sec

50℃ 20 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为208bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。