耐甲氧西林金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒

英文名称：Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus(MRSA)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

产品及特点

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistance Staphylococcus aureus，MRSA）是一种革兰阳性球菌，是引起细菌性食物中毒和院内感染的 一种主要病原菌，是金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的一种。作 为一种潜在的超级细菌，MRSA 几乎对所有β-内酰胺类的抗生素产生了耐药性， 该特性不但增加了治疗的复杂性和难度，也增加了抗生素的消耗量和医疗费用， 因此 MRSA 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，目前常用的检 测鉴定 MRSA 的 PCR 法敏感、快速，但由于需要昂贵的仪器设备、繁琐的电 泳过程，而使其难以在基层单位普及和推广，因此建立新的简便易推广的 MRSA 的检测方法具有重大的意义。为此本公司开发了简单快捷的耐甲氧西林金黄色 葡萄球菌 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 MRSA 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对 MRSA 保守基因的特异引物，比使用 2 条引 物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。

7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。MRSALAMP 阳性对照最好单独放 置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取 试剂盒兼容，包括本公司的一管式细菌 DNAout 或其升级版柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对 照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是 直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个样品一起进行细菌 DNA 提取 操作，得到 N+2 个 DNA 样品。

二、LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩 增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下 列成分：

成分 N+2 个 样品管 LAMP 阴性对照管 LAMP 阳性对照管

2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 各 10 μL 10 μL 10 μL

MRSA LAMP引物混合液 各 4 μL 4 μL 4 μL

N+2 个样品 DNA 各 6 μL - -

LAMP 阴性对照（水） 6 μL

LAMP 阳性对照（MRSA LAMP阳性对照的10000 倍稀释液） - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反 应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反 应后比对。

5. 置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增 60-120 分钟（如果不使用 Loop 引物，则最好保温 2 小时）。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水 以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50uL 石蜡油，否则保温期间反 应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照 相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳 性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品）：

9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为 200bp 的梯形 扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结 果。此处的 9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样 品）。

10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实 验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它 溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix 被污染。