小鼠肝炎病毒RT-PCR试剂盒

小鼠肝炎病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Mouse Hepatitis Virus(MHV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus，MHV)会引起小鼠肝炎，但在正常情 况下大多呈不显性感染，只在应激因素激发下才能成为致死性疾病，主要为肝炎 和脑炎。老龄小鼠感染后会出现腹水，乳鼠，或在球状附红细胞体参与下感染的 成年小鼠，肝呈黄色或褐色，并有出血斑点；肾肿胀而苍白。小鼠肝炎病毒，无 论在体内外，均易建立持续感染，带毒小鼠分布于全世界，感染范围广，影响力 大，因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研 领域快速定量检测小鼠肝炎病毒。它具有下列特点。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据小鼠肝炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 小鼠肝炎病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当 于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀， 此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充 分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加 水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成份 N+2 个样品管 RT-PCR 阴性对照 RT-PCR 阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的样品 各 12.5 μL 不加 不加

超纯水 不加 12.5 μL 不加

小鼠肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照 10000 倍稀释液 不加 不加 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 分钟

预变性 95℃ 5 分钟

PCR 反应 （30 个循环） 95℃ 30 秒 55℃ 30 秒 72℃ 60 秒

延伸 72℃ 5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 3750bp。 如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需 要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩 增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳 性，如果无则为阴性。