肺炎支原体PCR试剂盒

肺炎支原体PCR试剂盒

英文名称：Mycoplasma pneumoniae

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae ）是人类支原体肺炎的病原体。 支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性 非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期 2-3 周，发病率以青少年最高。临床 症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼 吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。本试 剂盒是根据 PCR 原理开发，具有下列特点：

1. 免 DNA 制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。

2. 覆盖广，根据 16S rDNA 保守区设计引物，能检测 40 余种霉形体（包 括欧盟药典要求检测的 9 种支原体）。

3. 特异性高，跟梭状芽孢杆菌、链球菌和乳酸杆菌等亲缘关系相近的微生物 无交叉反应。

4. 灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照（DNA 片段），能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。

6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。

7. 本产品足够至少 50 次 40 μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反 应)。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性对照 PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

脑膜炎奈瑟菌 Y 群 PCR 引 物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

自备超纯水 - 18 μL -

PCR 阳性对照（脑膜炎奈瑟 菌 Y 群 PCR 阳性对的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 3 min

PCR 反应 （37 个循环） 92℃ 30 sec 55℃ 40 sec 72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 120bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。