人支原体PCR试剂盒

人支原体PCR试剂盒

英文名称：Mycoplasma hominis

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

支原体（mycoplasma）是 1898 年 Nocard 等发现的一种类似细菌但不具 有胞壁的原核微生物，能在无生命的人工培养基上生长繁殖，直径 50-300nm， 能通过细菌滤器。又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物，支原 体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只 有核糖体)。基因组多为双链 DNA，散布于整个细胞内没有形成的核区或拟核。 与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种，约有 20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上两种支原体引起的，是非淋菌性 尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。因此对支原体进行快速灵敏的诊断具有重要 的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增支原体 DNA，但跟其他微生物无交 叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性对照 PCR 阳性对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

脑膜炎奈瑟菌 Y 群 PCR 引 物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

自备超纯水 - 18 μL -

PCR 阳性对照（脑膜炎奈瑟 菌 Y 群 PCR 阳性对的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 3 min

PCR 反应 （37 个循环） 92℃ 30 sec 55℃ 40 sec 72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 120bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。