小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-4周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽 疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性传染病。它是世界 动物卫生组织(OIE)法定的 A 类传染病,我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是专门用于小 反刍兽疫病毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒，在动物或者动物产品的检测领域有广泛用 途，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 双酶一管式 RT-PCR，操作简单快捷。本试剂盒足够 25 次 30uL 体系的 RT-PCR 反应。

3. 提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。

4. 引物经过优化，特异性高，引物是根据 PPR 病毒保守的 N 基因设计，产物长度为 1416 bp。 

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 6 个月。

自备试剂 样品 RNA。

使用方法 注意：所有离心管用前最好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个 30uL 体系的 RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。

一、样品 RNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 或柱 式病毒 RNAout。

二：RT-PCR

2、在一干净的无 RNase 的 PCR 管中，按下表配制 RT-PCR 反应体系（30 uL 体系）:

成份 样品管 阳性对照管 阴性对照管 RNA 模板（自备） 1-10 uL 无 无

PPRV 阳性对照 无 2uL 无

PPRV 专一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL

PPRV 专一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL

RNase-free 水 补水到 13 uL

双酶一管式 RT-PCR Buffer 15 uL 15 uL 15 uL

MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL

3、轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR，反应参数是：

过程 温度 时间 逆

转录 42℃ 60 min

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 1 min 55℃ 1 min 72℃ 2 min

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

4、取 10-20 uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为 1416 bp。阳性对照必须出现 1416bp 的 PCR 产物，否则 PCR 体系有问题，需要寻找原因。 如果阴性对照出现 1416bp 的 PCR 产物，则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污染， 需要把样品制备和 RT-PCR 隔离进行。