猴T淋巴细胞趋向性病毒1型RT-PCR试剂盒

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型RT-PCR试剂盒

英文名称：Simian T Lymphotropic Virus Type 1(STL V-1) 

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

猴 T 淋巴细胞趋向性病毒 1 型（Simian T Lymphotropic Virus Type 1，STLV-1)为逆转录病毒，核酸为 RNA，属于亚洲非人灵长类动物容易感染一种病毒，该病毒主要侵害猴的免疫系统，与恶性淋巴瘤、淋巴组织增生等疾病密切相关，通常感染后再较长时间不呈现明显的临床症状，在此期间它的携带者容易传染给其他易感猴，对猴的健康造成严重影响，因此检测猴 T 淋巴细胞趋向性病毒 1型 RNA 具有重要意义。为此本公司基于 RT-PCR 原理开发了本产品，它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据猴 T 淋巴细胞趋向性病毒 1 型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备 1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 猴 D 型逆转录病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混 匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中， 充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加 水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴性对照 RT-PCR 阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

猴 D 型逆转录病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个 DNA 样品 各 12.5 μL 不加 不加

猴 D 型逆转录病毒 RT-PCR 阳性 对照 10000 倍稀释液 不加 不加 12.5 μL

超纯水 不加 12.5 μL 不加

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 60 分钟

预变性 94℃ 3 分钟

PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 30 秒 56℃ 30 秒 72℃ 40 秒

延伸 72℃ 3 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 452bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性。