金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒

金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒

英文名称：Staphylococcus aureus

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：1-3天

其他： 

产品及特点

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。目前常用的检测鉴定金黄色葡萄球菌的 PCR 法敏感、快速，但由于需要昂贵的仪器设备、繁琐的电泳过程，而使其难以在基层单位普及和推广，因此建立新的简便易推广的金黄色葡萄球菌检测方法具有重大的意义。为此本公司开发了简单快捷的金黄色葡萄球菌 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增金黄色葡萄球菌特异片段，不需要荧光 PCR 等贵

重仪器。同时扩增时间只需要 1h，适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对金黄色葡萄球菌保守基因的特异引物，比使用

2 条引物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。

7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。金黄色葡萄球菌 LAMP 阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。金黄色葡萄球菌 LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为 LAMP

阳性对照，样品制备阴性对照是直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N个样品一起进行 DNA 提取操作，得到 N+2 个 DNA 样品。

二、LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分：

成分 N+2 个样品管LAMP阴性对照管LAMP阳性对照管

2×可视化 UNG-LAMP

MagicMix 各 10 μL 10 μL 10 μL

金黄色葡萄球菌 LAMP 引

物混合液 各 4 μL 4 μL 4 μL

N+2 个样品 DNA 各 6 μL - - LAMP 阴性对照（水） 6 μL

LAMP 阳性对照（金黄色

葡萄球菌LAMP 阳性对照

的10000倍稀释液） - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。

5. 置于 25℃5min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 61℃扩增60min。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

6. 80℃10min 灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳

性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：

9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的

电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号和10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）。

10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix被污染。