鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)PCR试剂盒

鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)PCR试剂盒

英文名称：Yersinia pestis

运输： 低温

保存： -20℃

有效期： 一年

货期： 1-3天

 其他：

产品介绍：

产品及特点

鼠疫耶尔森菌也叫做鼠疫杆菌（Yersinia pestis）是鼠疫的病原菌，鼠疫 是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病，人类鼠疫多为疫鼠的跳蚤叮咬而感 染， 是我国法定的甲类传染病。此菌引起的是啮齿动物中的自然疫源性疾病， 传染性 强，病死率高，易酿成大流行，此菌主要累及皮肤和淋巴结，其次为败 血症、肺炎、脑膜炎，对人体健康有较大危害，因此快速灵敏检测鼠疫耶尔森 菌具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下 列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增鼠疫耶尔森菌，与其他微生物没有 交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 鞭虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

鞭虫通用 PCR 引物混合 液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（鞭虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 57℃ 15 sec 72℃ 40 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物 阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。