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| 别名: | 乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | ||
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| 储存条件: | 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。 | ||
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| 货号 | 规格 | 可用库存 | 销售价(RMB) | 您的折扣价(RMB) | 购买数量 |
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| 储存条件: | 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。 |
乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Lactobacillus PCR Kit
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：2-3周
其他：
产品介绍
产品及特点
乳酸杆菌（Lactobacillus，LB）是指能使糖类发酵产生乳酸的细菌，是一 群生活在机体内益于宿主健康的微生物，它维护人体健康和调节免疫功能的作用 已被广泛认可。乳酸杆菌属乳酸杆菌科，因发酵糖产生大量乳酸而命名，其存在 广泛，嗜酸性，生存最适 pH 为 5.5～6.0，在 pH3.0～4.5 的环境中仍然能生 存，它在无芽胞杆菌中是耐酸力最强的。乳酸杆菌还可以用来治疗妇科炎症、儿 童艾滋病、儿童糖尿病、畜禽肠道疾病等，具有较高的医疗价值，因此快速检测 乳酸杆菌具有重要意义。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，本产品 就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测乳酸杆菌的试剂盒，它 具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据人乳酸杆菌高度保守的区域设计，不会跟其他微生物 的 DNA 发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。 由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本 产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， 下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂 盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒 免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直 接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后最后加）：
成分 样品管 PCR 标准曲线 N+2 个 阴性对照 样品管（2-7 管）
2×Probe qPCR MagicMix 各 10 μL 10 μL 各 10 μL
乳酸杆菌 qPCR 探针 各 2 μL 2 μL 各 2 μL
乳酸杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 各 2 μL
N+2 个待测样品 DNA 模板 各 6 μL 不加 不加
第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） 不加 不加 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
过程 温度 时间
预变性 95℃ 3 min
PCR 反应 （40 个循环） 95℃ 30 s 60℃ 35 s（采集 FAM 通道的荧光信号）
五、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
