柑橘顽固病螺原体PCR试剂盒

柑橘顽固病螺原体PCR试剂盒

英文名称：Spiroplasma citri

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

柑橘顽固病是柑橘生产上一种严重的病害。在炎热的气候条件下，病害能 大大降低果实的产量和质量。由于病害能通过昆虫介体传播，因此顽固病的防 治很困难。病原体通过苗木和接穗传播，田间由叶蝉传播。柠檬螺原体侵染寄 主韧皮部的筛管组织。病原体持久侵染植株，直到植株衰退。实际上，它是一 种专性寄生物，存活在柑橘及其他寄主的体内，而不腐生在植株表面。因此快 速灵敏检测柑橘顽固病螺原体具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原 理开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增柑橘顽固病螺原体，与其他微生物 没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 柑橘顽固病螺原体 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

柑橘顽固病螺原体 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（柑橘顽固 病螺原体 PCR 阳性对照 的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 57℃ 15 sec 72℃ 40 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物 阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。