牛源性成分PCR检测试剂盒

牛源性成分PCR检测试剂盒

英文名称：Bovine-Derived Material PCR Kit 

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有牛的成分。由于很多国家禁止将牛源性成分作为蛋白添加剂加入到饲料中以避免疯牛病的扩散，因此从饲料和其他材料中快速灵敏地检测牛成分具有重要的意义。本产品根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。

2. 根据牛线粒体保守基因设计引物，能专一性地检测出牛的成分，但不能检测其他非牛类动物的成分。

3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中牛成分的检测下限为 0.1%，对样品中牛成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较

高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

自备试剂 DNA 模板

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：

3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。

4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg（半粒芝麻大小）实体待测样品或 5uL液体样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。

5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。

6. 95℃保温 10 分钟。

7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）

8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用天净沙 DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果最好的那个模板用量）：

成 份 样品（用量 1） 样品（用量 2） 阳性对照 阴性对照

即用型 PCR Mix 3.0 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

牛源性PCR引物混合液 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL

制备的样品 18 uL 2 uL 无 无

样品制备阳性对照 不加 不加 2 uL 不加

样品制备阴性对照 不加 不加 不加 2 uL

超纯水 不加 16 uL 16 uL 16 uL

9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。

过程 温度 时间

预变性 94℃ 3 分钟

PCR 反应

（35 个循环）

94℃ 45 s

56℃ 60 s

72℃ 60 s

延伸 72℃ 5 分

10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 271bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对应没有扩增的样品，需要用通用引物（如真核生物专一 PCR 引物，需自备）测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求，如果通用引物也扩不出来，需要浓缩并再次纯化 DNA 样品，或者更换 DNA 提取方法，直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。