柑橘衰退病毒RT-PCR试剂盒

柑橘衰退病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Citrus Tristeza Virus(CTV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

柑橘衰退病毒(Citrus Tristeza Virus，CTV)是对世界柑橘生产具有严重危害的重要病原物之一。主要通过嫁接和蚜虫在世界各柑橘产区广泛传播。我国广泛分布着 CTV 的各种强毒株和强力传媒褐色桔蚜,随着柚类和甜橙类品种的推广,CTV 茎陷点型强株系的为害日趋严重。该病毒属长线形病毒科长线形病毒属的单链 RNA 病毒。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测柑橘衰退病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据柑橘衰退病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分

分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。 自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 柑橘衰退病毒 PCR阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份N+2 个样品管RT-PCR阴性对照RT-PCR阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

柑橘衰退病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL 不加 不加

超纯水 不加 12.5 μL 不加

柑橘衰退病毒 RT-PCR 阳性对照

的 10000 倍稀释液

不加 不加 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 分钟

预变性 95℃ 5 分钟

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 15 秒

49℃ 15 秒

延伸 72℃ 1 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 370bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。