大鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

大鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Rattus-Derived Material Probe qPCR Kit

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：1-2周

 其他：

产品介绍：

产品及特点 本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有大鼠的成分。现代食品加工工艺极 大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技 术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因 检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品 就是为满足这一需求根据探针法 qPCR 原理开发的产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 根据大鼠保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的大鼠成分，但 不能检测其他非大鼠成分。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

6. 对混合样品中大鼠成分的检测下限为 0.01%，对样品中大鼠成分的核酸检测下 限为0.1ng/µL。

7. 本只能用于科研，足够 50 次 20μL 体系的荧光定量 PCR。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较 高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

自备试剂 DNA 模板

使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标 准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对 照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上 步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲 线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板）。下 面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：

成分 样品管 N+2 个 PCR 阴性 对照管 标准曲线 样品管（2-7 管）

2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL

大鼠源性成分探针法 qPCR 探针 1 μL 1 μL 各 1 μL

大鼠源性成分探针 法 qPCR引物混合液 2 μL 2 μL 各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 7 μL - -

超纯水 - 7 μL -

第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） - - 各 7μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号 管…）

四、qPCR 反应参数

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （40 个循环） 95℃ 15sec 60℃ 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号）

五、数据处理

11. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为 纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓 度的log 值，再推算出其浓度。

12. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或 等于39。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等 于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于39则为阴性，如果小于或等于35则为 阳性。如果在35-39之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于39则为 阴性，如果小于35，则为阳性。