小鼠线粒体DNA探针法荧光定量PCR试剂盒

小鼠线粒体DNA探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Mouse mtDNA Probe PCR Kit 

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

线粒体是真核生物产生能量的重要细胞器，它具有自身的基因组，线粒体 DNA 和细胞核 DNA 共同决定真核生物的表现型，因此研究线粒体 DNA 具有重要的意义。本试剂盒基于荧光定量 PCR 原理开发，可用于定量分析小鼠线粒体 DNA。它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 根据小鼠线粒体 DNA 保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的小鼠线粒体 DNA 成分，但不能检测其他非小鼠线粒体 DNA 成分。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

自备试剂 DNA模板

使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在7号管中加入5 μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7. 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的核酸释放剂试用装。

三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

9. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品（也充当PCR阳性对照）。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分 样品管

N+2个 PCR阴性对照管 标准曲线

样品管（2-7管）

2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各10 μL

火鸡源性成分探针法qPCR阳性对照（1×10E8拷贝/uL） 1 μL 1 μL 各2 μL

火鸡源性成分探针法qPCR

引物混合液 2 μL 2 μL 各2 μL

 待测样品DNA模板 7 μL 不加 不加

第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） 不加 不加 各7μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）

四、qPCR反应参数

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR反应

（35个循环） 94℃ 0.5 min

60℃ 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号）

72℃ 0.5 min

最后延伸 72℃ 10 min

五、数据处理

11. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

12. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。