小鼠线粒体DNA LAMP试剂盒

小鼠线粒体DNA LAMP试剂盒

英文名称：Mouse mtDNA LAMP Kit 

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：1-2周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

线粒体是真核生物产生能量的重要细胞器，它具有自身的基因组，线粒体DNA 和细胞核 DNA 共同决定真核生物的表现型，因此研究线粒体 DNA 具有重要的意义。为此本公司开发了简单快捷的小鼠线粒体 DNA 可视化 LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 样品。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增小鼠线粒体 DNA 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对小鼠线粒体 DNA 保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的 PCR 专一性更高。

5. 可视化，由于 LAMP 中含可视化染料，扩增后可以在不开盖的条件下直接肉眼观察结果，减少对仪器设备的依赖和对后续实验的污染。

6. 整合 UNG-dUTP 防污染系统，可以防止实验污染这一非常棘手的问题（尤其在实验条件不规范的场合）。

7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

8. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。小鼠线粒体 DNA 阳性对照 2.0 最好 单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品DNA的制备

1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送30次DNA释放剂试用装。

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个阳性对照和一个阴性对照。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL牦牛源性成分阳性对照2.0作为阳性对照，阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行病毒DNA提取操作。

二、LAMP（20μL体系）

3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+3个LAMP扩增，增加一个不加引物的阴性对照。在N+3个PCR管中加入下列成分：

成分 样品管

N个 无模板

阴性对照 无引物

阴性对照 阳性对照

LAMP

MagicMix 各10 μL 10 μL 10 μL 10 μL

牦牛源性成分

LAMP引物Mix 各4 μL 4 μL - 4 μL

样品DNA模板 各6 μL - - -

阴性对照（纯化后） - 6 μL - -

自备超纯水 6 μL

阳性对照（纯化后） - - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常淡的蓝色，用手机在白色背景前照相留底。

5. 置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

6. 反应结束后将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

7. 实验结果分析。阳性对照将呈现淡蓝色，无模板和无引物阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9号为阴性，10号为阳性，此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品）：

8. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取10μL LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），最好使用100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为200bp的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）：